Stellar 蛍光検出用モジュール
Jess専用のStellar蛍光検出用モジュール –最高水準の蛍光検出感度でシンプルウェスタンのマルチ解析
Jess用Stellar™ NIR / IR検出モジュールは、ウェスタンブロッティング用蛍光検出感度の業界標準を打ち立てました。 ステラ蛍光モジュールは、同じレーン内の総タンパク質染色と一緒にマルチカラーイムノアッセイ等、微量タンパク質の検出と、複数ターゲットのマルチプレックスmultiplexing検出を実現します。ステラNIR/IR検出モジュールをJessで使用すると、以下の機能を享受することができます。
- 総タンパク質ノーマライゼーションに加えて、トータル/リン酸化ペアや多重化イムノアッセイ等、同じレーン内の複数のターゲットを多重免疫測定
- 総タンパク質標準化と多重免疫並行測定
- NIR/IR蛍光チャネルで1pg以下のタンパク質も検出する超高感度レベルの感度
- 低濃度領域における総タンパク質標準化の実施
- 4logのダイナミックレンジで優れたシグナル直線性を実現
- Jessのウェスタンブロッティングワークフローの完全自動化と柔軟な多重測定ストラテジー
ステラNIR/IRで蛍光ウェスタンブロットの感度を大幅にアップ!
| Jessで 化学発光 | Jess で Steller NIR | Jess で Stellar IR | 競合の蛍光ウエスタンブロッティング技術 | |
|---|---|---|---|---|
| RNase AのLOD | 1.1 pg | 0.4 pg | 0.7 pg | > 50 pg | u
Stellar NIR / IR蛍光は、Simple Western™の化学発光に匹敵する検出感度で、競合する従来の蛍光ウエスタンブロッティング技術よりも高い感度を提供します。Jessで化学発光、ステラNIR（赤いバンド）、ステラIR（緑のバンド）検出モジュールを用いて求めたRNase Aの検出限界（limit of detection; LOD）と、競合するウェスタンブロット蛍光イメージングシステムとの比較。これは、Jessの化学発光検出感度 (1.1 pg) に匹敵するものです。Jessのすべての結果を線形回帰分析すると、R2値>0.99でした（データはアプリケーションノートを参照app note）。ステラ蛍光を用いたJessは、競合する従来のウェスタンブロット蛍光イメージングシステムよりも100倍高い検出感度を実証しました。
超高感度の仕組みは?
トータル/リン酸化ペア等、複数のターゲットを同一レーンでマルチプレックス
Jess用ステラNIR/IRモジュールは、同一キャピラリー内の複数のターゲットを優れた再現性で検出します。
Stellar IRとNIR蛍光検出によるトータルとリン酸化タンパク質のマルチプレックス分析。. Calyculin Aで処理したJurkat細胞ライセート(0.2 mg/mL)をmouse anti-total AKTとrabbit anti-pAKT primary antibodyでプロービングした結果。Stellar IR（緑色のバンド）とStellar NIR（赤いバンド）を用いて、優れた再現性（24レーンにおいてpAKTは<10%のCV、トータルAKTは<5%のCV）で高感度マルチカラー同時検出を実現。
総タンパク質の標準化と組合わせた複数ターゲットのマルチプレックス
Jess用のステラNIR/IRモジュールを用いると、同じキャピラリー内で複数のターゲットをマルチプレックスするだけでなく、ステラ 総タンパク質アッセイを行い、イムノアッセイシグナルを正規化してより正確な結果を得ることができます
Stellar Total Protein Assayでマルチプレックス・イムノアッセイデータをノーマライズ - 全て同一サンプルで。Stellar Mouse IR Detection ModuleとStellar Rabbit NIR Detection Moduleを用いて、未処理（-）およびカリクリンA処理（+）した0.25mg/mLと0.15mg/mLのJurkat細胞ライセートをそれぞれ用いて、Total AKT (IR, 緑のバンド) とphospho AKT (NIR, 赤のバンド) をマルチカラー多重分析した。Stellar Total Protein Assay (上、右) と共に、両方のライセートを各抗体で単独およびマルチプレックス (上、左)測定した。未処理サンプルをリファレンスとして総タンパク質量でノーマライズすると、pAKTとTotal AKTのピーク面積値はそれに応じて調整され（下）、カリクリンA処理後のpAKT（9倍 vs 14倍）とTotal AKT（0.8倍 vs 1.2倍）のタンパク質発現変化をより正確に測定した。Stellar NIR/IRは総タンパク質でノーマライズしながらターゲットをマルチプレックスし、1つのサンプルからより多くのデータを取得し、正確な定量を行います。
マルチプレックス実験でデータ取得時間の短縮
Jess用のステラNIR/IRモジュールは、同じレーンで同一分子量のタンパク質を同一種の抗体antibodiesでマルチプレックスし、化学発光を用いたRePlex™や従来のウェスタンブロットに比べ、データを取得するまでの時間を短縮します。
JessはRePlex連続イムノアッセイや、Stellar IR & NIR蛍光を用いた異なる検出チャンネルで分離するマルチプレキシングなど、複数ターゲットを検出する複数のオプションを提供します。. Calyculin Aで未処理（-）または処理（+）したJurkat細胞の0.2 mg/mLライセートを、Mouse anti-total AKT抗体とRabbit anti-pAKT抗体を一次抗体としてプロービングした。両方のターゲットは、Stellar 多重化蛍光 (Mouse IRとRabbit NIR) またはRePlexアッセイ (最初のプローブはトータルAKT、次のプローブはリン酸化AKT) で化学発光検出しました。Stellar NIR/IR と RePlex は、同一レーン内の Total AKT と リン酸化AKTターゲットを検出します。化学発光チャンネルを用いたJessによるRePlexのランタイムが5時間であるのに対し、Stellar NIR / IRは約3時間で完了した。Jessの両手法は、従来のウェスタンブロッティングワークフローと比べて、マルチターゲットデータ取得までの時間を劇的に短縮します。
Jess用のStellar NIR / IRを用いたウェスタンワークフローは、最高の蛍光検出感度でマルチプレックスを実現します!
Jessシステム用のStellar NIR/IRとStellar Total Protein検出モジュールの注文については、営業担当者にご相談ください。